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            基因編輯陽性細胞的富集報告系統
            張力弦 , 王啟扉 , 曹楊 , 葉承宇 , 陳智洋 , 徐啟杰 , 鄒秉杰 , 宋沁馨 , 周國華
            doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191322
            基因編輯技術已成為醫學生物學研究的重要工具,將不同基因快速高效地富集到基因編輯陽性細胞并進行針對性研究是促進基因編輯技術發展的關鍵。近年來,基于非同源末端接合、同源直接修復、單鏈退火、倒位重排等基因組修復機制,研究者利用熒光蛋白或抗性標簽基因修復后表達的原理,建立了多種可用于基因編輯陽性細胞篩選與富集的報告系統。富集后的細胞采用T7E1酶切法或測序技術進行突變分析,呈現顯著降低的背景信號和增加的突變比例。此類報告系統有利于基因編輯效果的表征。此外,分選后的陽性細胞可繼續培養,在突變細胞系構建及突變細胞功能研究等領域具有良好的發展前景。本文對這些報告系統的設計原理與應用進行了總結,以期為建立更加完善的基因編輯評價系統提供參考。
            關鍵詞: 基因編輯, 修復機制, 細胞富集, 報告系統, 評述
            基于核酸侵入反應偶聯PCR的糞便樣本基因甲基化定量分析方法及用于結直腸癌無創篩查
            劉琳琳 , 齊謝敏 , 鄒秉杰 , 宋沁馨 , 周國華
            doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.181117
            從糞便中檢測BMP3基因甲基化水平可實現對結直腸癌的無創篩查,但對檢測方法的靈敏度與特異性要求很高。本研究將核酸侵入反應與實時熒光聚合酶鏈式反應(PCR)偶聯,建立了BMP3基因甲基化檢測方法,以ACTB基因作為參比基因,通過優化反應體系中探針濃度、Flap核酸內切酶與Taq酶用量,提高BMP3目標基因與ACTB參比基因的擴增效率至接近100%,實現了利用ΔCT法進行BMP3基因甲基化水平的相對定量,可對低至10 copies的甲基化BMP3基因進行檢測,并可從非甲基化模板中準確定量0.01%的甲基化模板,非甲基化模板不產生非特異性信號,表明本方法具有極高的靈敏度與良好的特異性。將本方法用于16例結直腸癌患者、7例結直腸腺瘤患者及19例健康人糞便樣本中BMP3基因甲基化檢測,結果表明,有5例結直腸癌患者的糞便樣本檢出BMP3基因甲基化,2例結直腸腺瘤患者的糞便樣本檢出BMP3甲基化,健康人的糞便樣本均沒有檢出甲基化,表明本方法可用于檢測糞便樣本中基因的甲基化水平,為臨床開展基于糞便中基因甲基化檢測的無創結直腸癌篩查提供了新方法。
            關鍵詞: DNA甲基化, 實時熒光聚合酶鏈式反應, 核酸侵入反應, 結直腸癌, 糞便DNA
            新型冠狀病毒SARS-CoV-2核酸檢測技術平臺的研究進展
            盛楠 , 馬雪萍 , 逄淑云 , 宋沁馨 , 鄒秉杰 , 周國華
            doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201259
            新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)已蔓延至全球,嚴重威脅人類的健康。SARS-CoV-2傳染性強、潛伏期長,且存在無癥狀感染者,因此,準確檢測SARS-CoV-2對疫情防控至關重要。核酸檢測技術在防控工作中發揮了舉足輕重的作用,目前已開發出多種用于SARS-CoV-2核酸檢測的方法,有些方法已被開發成試劑盒應用于臨床檢測。然而,這些方法原理各異,檢測平臺也不同,因此,選擇合適的SARS-CoV-2核酸檢測方法對疫情防控至關重要。本文介紹了目前核酸檢測方法的原理與技術平臺,比較了各方法的優缺點,明確了各類方法的應用范圍,以期為選擇合適的SARS-CoV-2核酸檢測方法提供參考,對今后開發類似SARS-CoV-2的病原體檢測方法提出展望。
            關鍵詞: 新型冠狀病毒, 核酸檢測, 技術原理, 評述
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